Verbesserte Erweiterung des eukaryotischen genetischen Codes für seitenspezifische, hochauflösende Click-PAINT-Mikroskopie

Hochauflosende Mikroskopie (SRM) profitiert von der Moglichkeit der Einfuhrung kleiner photostabiler Fluoreszenzmarkierungen in Proteine. Die Erweiterung des genetischen Codes (GCE) erfullt diese Anforderung, indem sie es ermoglicht, kleine Markierungsstellen in Form einzigartig reaktiver nichtkanonischer Aminosauren (ncAAs) an beliebigen Stellen im Zielprotein einzubringen. Allerdings limitieren die geringe Effizienz des Einbaus der ncAAs und die hohe Hintergrundfluoreszenz die Anwendung fur SRM. Die Anderung der subzellularen Lokalisierung des Pyrrolysin-basierten GCE-Systems fur Click-Chemie in Kombination mit der DNA-PAINT-Mikroskopie ermoglicht es, sogar in geringen Mengen vorkommende Proteine in Saugerzellen zu visualisieren. Dieser Ansatz verknupft eine vielseitige, biokompatible und potenziell nicht ausbleichende Markierungsmethode mit einer seitenrestspezifischen Prazision. Daruber hinaus eliminiert unser modifiziertes GCE-System unspezifische Hintergrundfluoreszenz und erhoht die Expressionsausbeute stark, was auch fur eine Verbesserung des Protein-Engineerings in Eukaryoten mittels GCE von Interesse ist.