靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用.方法 设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1的CAR-T核心质粒,采用BamH Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切鉴定,应用流式细胞术检测多种实体瘤癌细胞株表面ROR1的表达,并采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)检测试验检测CAR-T对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA检测试剂盒测定培养细胞上清中γ-干扰素(IFN-γ)含量.结果 构建的CAR-T质粒双酶切鉴定有CAR基因插入,流式细胞术检测结果显示CAR-T感染效率约为47.23％.多种肿瘤细胞不同程度表达ROR1.流式细胞术、LDH检测试验结果提示CAR-T能特异性地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞.CAR-T针对ROR1阳性靶细胞能释放更多的IFN-γ(P＜0.05).结论 成功构建靶向ROR1的CAR-T,并能特异地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞,释放大量IFN-γ,为临床应用提供了实验基础.