铁载体毒力基因 entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌毒力的影响

目的:明确铁载体毒力基因 entB对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）毒力的影响。 方法:从昆明医科大学第一附属医院收集到的30株CRKP菌株中筛选出CRKP-27作为实验菌株，规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）-Cas9基因敲除技术构建 entB基因缺失株Δ entB、回补株C-Δ entB，并通过PCR验证敲除及回补是否成功。观察CRKP-27、Δ entB、C-Δ entB菌株的菌落形态并进行拉丝试验，初步了解 entB对CRKP菌落形态和毒力表型的影响。绘制菌株生长曲线，测定 entB对CRKP菌株生长的影响。铬天青S（CAS）检测液对菌株产铁载体能力进行定量检测。建立小鼠腹腔感染模型，观察小鼠生存率直观了解 entB基因对CRKP毒力的影响。计量资料均采用平均数±标准差表示，服从正态分布的数据采用方差分析进行组间比较，不服从正态分布的数据采用Kruskal-Wallis秩和检验。小鼠生存分析用Log-Rank检验进行比较。 P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果:PCR结果显示缺失株和回补株构建成功。 entB基因对CRKP的菌落形态、荚膜和毒力表型无明显影响。Δ entB组的生长速度明显快于CRKP-27组（ P=0.008）和C-Δ entB组（ P=0.001），说明 entB基因削弱了CRKP菌株的生长能力。 entB组与CRKP-27组（ P=0.001）和C-Δ entB组（ P=0.001）相比铁载体产量明显下降，分别下降11.739 3%和11.964 2%，说明 entB基因显著增加了CRKP产铁载体能力。动物实验中，与CRKP-27组（ P=0.023）和C-Δ entB组（ P=0.024）相比，Δ entB组小鼠生存率明显增高，说明 entB基因增加了CRKP菌株的毒力。 结论:铁载体毒力基因 entB明显减弱了菌株的生长能力，但使CRKP产铁载体能力、毒力明显增强。