miR-375通过调控EMT参与HER2阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗的耐药

目的:探讨微RNA-375(microRNA-375,miR-375)通过调控上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),参与人类表皮生长因子受体2 (human epidermal growth factor receptor 2,HER2)阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗耐药的作用及其可能的分子机制.方法:应用MTT法检测并比较HER2阳性乳腺癌亲本敏感细胞株SK-BR-3和耐药细胞株SK-BR-3R对曲妥珠单抗的敏感性,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测两种细胞中miR-375以及EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平.将miR-375模拟物转染耐药细胞SK-BR-3R后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞中miR-375、E-cadherin和vimentin表达水平的改变,MTT法检测耐药细胞对曲妥珠单抗的敏感性变化.应用生物信息学软件预测miR-375的靶基因,并选取异黏蛋白(metadherin,MTDH)基因作为靶基因.进一步应用荧光素酶报告基因系统检测miR-375对MTDH基因的转录调控作用.设计特异性针对MTDH基因的siRNA,并将其转染耐药细胞SK-BR-3R后,采用蛋白质印迹法观察MTDH表达被干扰后细胞中E-cadherin和vimentin表达水平的改变.结果:与敏感细胞株SK-BR-3相比,耐药细胞株SK-BR-3R对曲妥珠单抗的敏感性明显降低(P＜0.001),而且耐药细胞SK-BR-3R中miR-375和vimentin的表达水平均明显下调(P＜0.001,P＜0.05),而EMT特征蛋白E-cadherin的表达水平明显上调(P＜0.05).miR-375模拟物转染耐药细胞后,miR-375的表达水平明显升高(P＜0.001),vimentin表达水平明显上调(P＜0.01),而E-cadherin表达水平下调(P＜0.001),并且耐药细胞株对曲妥珠单抗的敏感性升高(P＜0.001).miR-375对MTDH基因转录具有负向调控作用(P＜0.001).MTDH siRNA转染后,耐药细胞中MTDH和E-cadherin表达水平均下调(P值均＜0.001),而vimentin表达水平上调(P＜0.001).结论:miR-375通过调控细胞EMT,参与了HER2阳性乳腺癌细胞对曲妥珠单抗的耐药;这一作用可能与靶向调控MTDH表达有关.