NFKBIA 3'UTR不同基因型载体的构建及其功能差异性比较

验证NFKBIA基因3'非翻译区(3'UTR)两个SNP--rs8904C＞T和rs696G＞A的功能.以两个位点分别为CC纯合子和GA杂合子基因型的人全基因组DNA为模板,通过设计不同引物以扩增长度为503 bp的NFKBIA基因3'UTR片段,经测序验证后将该片段克隆至荧光素酶载体pGL3-promoter中,构建4种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G、pGL3-rs8904C/rs696A、pGL3-rs8904T/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696A,并转染LS 174T细胞,检测荧光素酶活性.与转染了pGL3-vector组(阴性对照)相比,转染重组双荧光素酶报告质粒的荧光素酶活性均显著下降(P＜0.001).对于rs696G＞A,含等位基因A的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696A和pGL3-rs8904T/rs696A的荧光素酶活性分别比含等位基因G的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696G下降约45.1％ (P＜0.05)和56.1％ (P＜0.001).对于rs8904C＞T,含等位基因T的两种重组质粒分别与含等位基因C的两种重组质粒相比,荧光素酶活性无显著性差异.NFKBIA基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功,并发现rs696G＞A会减弱荧光素酶活性的表达,rs8904C＞T对荧光素酶活性的表达无明显影响.