化疗联合自噬抑制剂对结肠癌细胞钙网蛋白膜表达的影响

目的 研究化疗药物联合自噬抑制剂对结肠癌细胞凋亡以及钙网蛋白(CRT)膜表达的影响.方法 以结肠癌细胞HCT116作为研究对象,采用MTT法检测化疗药物奥沙利铂、5-Fu和SN38对细胞的IC50值,流式细胞术检测化疗药物处理前后的细胞凋亡率和CRT膜表达比例的变化,免疫荧光法观察药物处理前后结肠癌细胞CRT表达部位的变化,Western blotting检测药物处理对HCT116细胞自噬的影响,并用流式细胞术检测药物联合自噬抑制剂氯喹(CQ)处理前及处理12h后细胞凋亡率和CRT膜表达比例的变化.结果 化疗药物奥沙利铂、5-Fu和SN38处理HCT116细胞12h后,细胞凋亡率和CRT膜表达比例均较对照组有所上升,但差异均无统计学意义.免疫荧光实验提示奥沙利铂处理后,CRT由细胞质转位至细胞膜.Western blotting结果提示3种化疗药物均可诱导HCT116细胞产生自噬,联合CC后其诱导自噬的作用受到抑制.化疗药物联合CQ处理HCT116细胞后,细胞凋亡率和CRT膜表达比例均较未用药物处理和单纯化疗药物诱导组增高;奥沙利铂联合CQ处理后CRT膜表达比例升高,与药物处理前比较差异有统计学意义(P=0.027).结论 化疗药物奥沙利铂联合自噬抑制剂CQ能使结肠癌HCT116细胞凋亡增多,CRT膜表达比例上升.