人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定

目的 研究含人连接蛋白Connexin26 (Cx26) 基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法.方法 提取人外周血淋巴细胞 RNA,经逆转录制备成 cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定.用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆.用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测.结果 从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功.RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达.结论 本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达.该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础.