几丁质膜作为表皮干细胞培养支架的实验研究

目的 了解大鼠表皮干细胞(ESC)与几丁质膜共同构建皮肤组织工程覆盖物的可行性.方法 采用冷消化法和Ⅳ型胶原贴壁法分离培养大鼠ESC.倒置显微镜观察细胞生长情况,激光共聚焦显微镜检测其DNA和RNA表达,澳玛蓝比色法测定ESC生长曲线,流式细胞仪检测ESC表面标志物CD29、CD71、CD49d和CD34,免疫组织化学法测定细胞角蛋白15(CK15)、CK19和P63阳性表达.检测不同倍比稀释几丁质膜浸出液对细胞的影响,并设常规培养为对照组;观察ESC在载体上的生长情况.结果 分离培养的细胞经鉴定确认为ESC,细胞倍增时间为48 h.其表面标志物CD29,CD49d为阳性,CD71、CD34为阴性;CK15、CK19、P63为阳性.几丁质膜浸出液培养的细胞与对照组比较,在1:8～1:512等比稀释时,有轻微的促细胞增殖作用但差异无统计学意义(P>0.05).ESC在几丁质膜上培养2～4周时,肉眼可见棋盘样细胞集落,显微镜下见大量ESC在纤维上增殖.结论 几丁质膜可以作为ESC的培养载体,两者有较好的生物相容性.