鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性

拟制备鸭肠炎病毒(DEV) gB抗原优势区的多克隆抗体,初步应用于该病毒的检测.以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物,通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD(331-570 bp),并在pET-32a(+)/Rosetta(DE3) pLysS系统中进行原核表达.经IPTG诱导获得与预期大小相符的重组蛋白质,以Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白质,利用DEV阳性血清检测重组蛋白质的抗原性,并用切胶纯化的重组蛋白质免疫家兔,制备兔抗DEV gB-AD血清.结果显示,重组蛋白质可被DEV阳性血清特异性识别,制备的兔源多克隆抗体I-ELISA效价为1∶10 240,且其具有中和活性;兔源多克隆抗体在还原电泳条件下显示DEV gB的相对分子质量约为66 ku,而在非还原电泳条件下DEV gB显示为相对分子质量约120和66 ku的两条目的带,通过间接免疫荧光试验和中和试验进一步证实制备的兔源多克隆抗体可特异性识别鸭肠炎病毒感染细胞所合成的gB蛋白.结果表明,所制备的兔抗DEVgB-AD多克隆抗体可作为检测DEV的试剂,为DEV检测及gB的功能研究提供必要的基础数据和材料.