高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷及其代谢物的含量

研究了三磷酸腺苷（ ATP）及其代谢物在细胞内的含量以及2?叔丁基?1，4?苯醌（ TBBQ）对ATP及其代谢产物在细胞内含量的影响。建立了一种高效液相色谱法（ HPLC）用于快速分离、检测细胞内ATP及其代谢产物（二磷酸腺苷（ ADP）和一磷酸腺苷（ AMP））的含量。使用岛津高效液相系统及艾杰尔Venusil MP C18柱，采用等度洗脱的方式。流动相A相为50 mmol／L磷酸氢二钠和15 mmol／L三甲胺（ TEA），用醋酸（ HAc）调节pH至7?88；流动相B相为甲醇。采用建立的高效液相色谱法得到了3种代谢物的工作曲线，相关系数高（R2≥0?9996）， MRC?5细胞中3种代谢物的含量均在线性范围（0?1～100μmol／L）内。该方法检出限低。采用预冷的80％（体积分数）甲醇水溶液提取细胞内的代谢物。该研究建立的方法成功地应用于检测MRC?5细胞中的ATP、ADP和AMP的含量，结果表明，TBBQ会对ATP、ADP、AMP在细胞内的含量产生影响，但 TBBQ浓度和 ATP、ADP以及 AMP在MRC?5细胞内浓度的关系比较复杂。