细胞外热休克蛋白70对严重烫伤大鼠肠道免疫功能的影响

目的 了解严重烫伤大鼠肠道细胞外热休克蛋白70(eHSP70)与IL-2表达变化及两者 间的关系,另体外观察eHSP70对严重烫伤大鼠肠道派伊尔结CD3+T淋巴细胞的影响. 方法 (1)取60只雄性SD大鼠,按随机数字表法分为正常对照组(仅麻醉)10只、烫伤组50只,烫伤组大鼠背部造成30％ TBSAⅢ度烫伤.正常对照组于麻醉后即刻,烫伤组于伤后3、6、12、24、48 h,各取10只大鼠处死,取小肠组织,ELISA法检测eHSP70和IL-2的表达并进行相关分析.(2)另取2只雄性SD大鼠,同前致伤后12h,分离小肠派伊尔结CD3+T淋巴细胞,用含体积分数10％ FBS的RPMI 1640培养液培养,按随机数字表法分为空白对照组和5、10、20 μg/mL eHSP70组,每组6孔.空白对照组不行其他处理,后3组培养液中分别加入相应质量浓度重组大鼠eHSP70.培养48 h,流式细胞仪检测CD3+T淋巴细胞中Th1和Th2百分比及细胞凋亡率,ELISA法检测细胞培养上清液中IL-2和IL-10的表达.细胞实验均重复10次.对数据行单因素方差分析、Kruskal-Wallis秩和检验、SNK-q检验、Pearson相关分析. 结果 (1)与正常对照组的(1 278±135)、(48.6±4.9) ng/mg比较,烫伤组大鼠伤后3、6、12、24、48 h肠道eHSP70[(728±93)、(412±31)、(314±21)、(528±40)、(1 028±97) ng/mg]和IL-2[(38.6±2.3)、(32.3±1.0)、(25.3±3.6)、(33.9±4.1)、(44.3±2.6) ng/mg]水平均明显降低(q值为3.48 ～5.32,P值均小于0.05),均于伤后12h达最低值.IL-2和eHSP70水平呈明显正相关(r =0.920,P＜0.01).(2)与空白对照组的(8.6±1.1)％、(3.75±0.45)％比较,5、10、20 μg/mL eHSP70组CD3+T淋巴细胞中 Th1百分比明显增高[(11.3±2.1)％、(15.7±1.8)％、(10.8±1.5)％,q值为2.97 ～ 4.57,P值均小于0.05],Th2百分比明显降低[(2.39±0.38)％、(1.05±0.23)％、(2.67±0.26)％,q值为2.48 ～4.32,P值均小于0.05].与空白对照组的(34.3±2.2)％、(254±16) pg/mL比较,5、10、20 μg/mL eHSP70组CD3+T淋巴细胞凋亡率明显降低[(26.1±2.6)％、(20.7±1.5)％、(31.5±2.4)％,q值为3.47 ～4.95,P值均小于0.05],细胞培养上清液中IL-2水平明显增高[(417±22)、(587±19)、(307±27) pg/mL,q值为3.02 ～4.98,P值均小于0.05].4组CD3+T淋巴细胞培养上清液中IL-10水平相近(F=2.12,P＞0.05). 结论 大鼠严重烫伤后肠道中eHSP70和IL-2的表达均降低,且两者呈明显正相关.eHSP70可体外促进严重烫伤大鼠肠道派伊尔结中CD3+T淋巴细胞向Th1方向分化,明显降低其凋亡率,促进其释放IL-2.