大分割剂量照射内皮细胞持续表达细胞因子模型的建立

目的:通过大分割剂量的X线照射人脐静脉血内皮细胞ECV-304,构建放射反应相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)持续表达模型,为探讨晚期放射反应中的分子靶点及干预策略提供基础.方法:大分割剂量的X线[5 Gy/(次·周),连续6周,总计30Gy]照射指数生长期的ECV-304,在第一次照射后1,3,24,72 h和后续每次照射后第5天及末次照射后第5,6,7,8周提取mRNA,采用qRT-PCR检测TNF-α、TGF-β1 mRNA水平的变化.于第一次照射后第1,3,24小时和后续每次照射后第5天,及末次照射后第4,6,8周收集细胞上清液,采用ELISA法测定其蛋白水平的表达情况.结果:正常ECV-304低表达TNF-α和TGF-β1.ECV-304细胞受到连续多次5 Gy剂量照射后,于不同时间点,TNF-α和TGF-β1 mRNA的表达均呈现先升高后降低的趋势,但始终高于正常水平.其中,TNF-α mRNA于末次照射后的第8周,表达量最高,为未照射时的(8.05±1.28)倍(P＜0.05);而TGF-β1 mRNA于末次照射后第5周升至高峰[为对照组(7.3±0.39)倍,P＜0.05].ECV-304细胞于单次照射后24 h,TNF-α、TGF-β1蛋白表达量即开始升高,和mRNA趋势一致,TNF-α蛋白至第6次分割剂量照射后第5天表达量最高[(479.10±21.94)pg/ml(P＜0.01)].而TGF-β1蛋白于末次照射后6周升至高峰,蛋白含量为(2 335.93±126.18)pg/ml(P＜0.01).结论:TNF-α,TGF-β1在大分割剂量照射后,在mRNA和蛋白水平均明显升高,照射后8周仍持续升高,结果表明放射反应相关因子TNF-α、TGF-β1持续表达细胞模型构建成功.