单独及联合转染survivin和bcl-2反义寡核苷酸诱导胆囊癌细胞凋亡的研究

目的:探讨单独及联合转染survivin、bcl-2反义寡核苷酸(AsODN)对胆囊癌细胞系GBC-SD的凋亡促进作用.方法:设计并合成特异性靶向survivin及bcl-2的AsODN.免疫组织化学法观察胆囊癌细胞中Survivin及Bcl-2蛋白的表达情况;实验分为4组:空白对照组、survivin AsODN转染组、bcl-2 AsODN转染组、联合survivin及bcl-2 AsODN转染组.转染24 h 后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin基因表达的变化,电镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测AsODN对细胞的生长抑制率.结果:Survivin及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中均有较高表达;单独及联合转染survivin及bcl-2 AsODN后,胆囊癌细胞内survivin基因mRNA表达下调47.8%;,电镜下胆囊癌细胞呈典型凋亡样改变;凋亡率分别为11.38%±3.91%(survivin AsODN组)、9.26%±4.15%(bcl-2 AsODN组)、28.45%±6.34%(联合转染组);分别与对照组相比差异有显著性(P＜0.01),而联合转染组同单独转染survivin AsODN组及bcl-2 AsODN组相比差异也有显著性(P＜0.05).各转染组相对于空白对照组的AsODN抑制率分别为54.3%,47.6%,76.5%.结论:Survivin及Bcl-2蛋白在胆囊癌细胞中呈高表达,单独及联合转染survivin和bcl-2反义寡核苷酸可促进胆囊癌细胞凋亡,而联合转染更具显著性.