脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞parkin 表达及线粒体自噬形成

目的：探讨巨噬细胞在脂多糖（ LPS）处理后parkin表达及对线粒体自噬的影响。方法：无菌分离并原代培养小鼠腹腔巨噬细胞；200 ng/ml LPS作用巨噬细胞，JC-1标记线粒体，流式细胞仪检测线粒体膜电位变化；RT-PCR 检测巨噬细胞parkin mRNA水平；Western blot 检测parkin及自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达水平；激光共聚焦显微镜分别检测巨噬细胞在LPS处理前后parkin在细胞内的分布及与LC3和线粒体三者的共定位情况。结果：JC-1染色流式细胞仪检测结果显示，LPS处理后，巨噬细胞线粒体膜电位降低，并随LPS作用时间延长呈持续下降趋势；parkin mRNA在LPS处理6 h内仅有少量的增加，但parkin蛋白水平在LPS刺激6 h后增加明显；parkin在巨噬细胞定位结果表明，未受LPS处理时parkin呈弥散均匀分布，而LPS刺激后parkin呈明显的点状聚集；Western blot检测结果显示巨噬细胞在LPS刺激后，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例增大，表明巨噬细胞发生明显的自噬；激光共聚焦显微镜结果显示，巨噬细胞在LPS 刺激后，parkin、LC3和线粒体三者存在共定位关系。结论：巨噬细胞在LPS刺激后，parkin表达增加并介导线粒体自噬形成，参与对损伤线粒体的清除，可能在巨噬细胞参与的炎症反应中发挥一定的调控作用。