巨片形吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶的克隆、表达和免疫学诊断价值评价

目的 免疫筛选巨片形吸虫成虫cDNA表达文库,并克隆和重组表达巨片形吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值.方法 用巨片形吸虫病患者的混合血清免疫学筛选巨片形吸虫成虫λ ZAPcDNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序及序列比对分析.将TPx基因全长片段和N段截短片段分别克隆至原核表达质粒pET28a(+)中,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化2种重组蛋白rFgTPx和rFgTPx_nt(N端截短型).以间接ELISA法,检测27例巨片形吸虫病患者治疗前后的血清,15例日本血吸虫病和15例华支睾吸虫病的患者血清,32位健康人血清,评价重组蛋白的免疫诊断价值.结果 克隆的巨片形吸虫TPx基因,经原核表达、纯化并复性,获得其可溶性重组蛋白rFgTPx和rFgTPx_nt,相对分子质量(Mr)分别为30 000和26 000.以重组蛋白rFgT-Px_nt为检测抗原的ELISA检测的敏感性为66.7％ (18/27),特异性为96.8％ (60/62),总符合率为87.6％ (78/89),与日本血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应率分别为0和1/15.巨片形吸虫病患者治疗前后血清的A450值分别为0.233±0.088和0.129±0.072,差异有统计学意义(t=4.27,P＜0.01). 结论 筛选并克隆了巨片形吸虫TPx抗原基因,实现原核表达,并证明该重组蛋白作为人体巨片形吸虫病的免疫诊断抗原具有较好的诊断意义,亦有可能具有早期诊断和疗效考核价值.