重组微线体MIC10的牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立牛弓形虫抗体间接ELISA检测方法,根据弓形虫MIC10基因序列设计合成引物,应用PCR技术扩增MIC10基因,将其克隆至pET-22b载体,构建重组质粒pET-22b-MIC10,将其转化至E.coli BI21(DE3),经IPTG诱导,SDS-PAGE及Western-blot分析表明,该重组蛋白能与弓形虫阳性血清发生特异性反应.重组蛋白经Ni-NTA纯化,应用牛弓形虫阳性、阴性血清建立了ELISA检测方法,抗原最佳包被质量浓度为5mg/L,二抗稀释倍数为1∶20 000,封闭液为含5％脱脂奶粉的PBST溶液.该方法重复性好、特异性强、敏感性高,为牛弓形虫流行病学调查奠定基础.