胃癌下调新基因CA11表达产物的组织分布和细胞定位

目的筛选胃癌下调基因,确定其表达产物的组织分布和细胞定位.方法从已成功建立的5人份正常胃粘膜mRNA(Tester)抑制消减杂交胃癌mRNA(Driver)的差异表达文库,随机挑取阳性克隆测序为CA11,RT-PCR证实其为下调基因.地高辛标记CA11原位mRNA杂交.在其它组织器官中扩增此基因,以表明其组织分布特异性.CA11克隆至载体pcDNA3.1/Myc-His(-)A中,并瞬时转染CA11的COS-7细胞.生长至对数生长期时,吸取培养液,Talon吸附、洗脱后,取洗脱液进行SDS蛋白电泳及Western blot .CA11转染COS-7细胞后加抗Myc标签的一抗,最后加FITC标记的二抗在荧光显微镜下观察.结果筛选到胃癌下调基因CA11,并经RT-PCR证实.mRNA 原位杂交显示,CA11位于胃粘膜上皮细胞.在其它组织器官cDNA文库及组织RNA中均未扩增出该基因.洗脱液Western blot 未检测到CA11与pcDNA3.1/Myc-His(-)A 的Myc融合表达蛋白存在;CA11表达蛋白亚细胞定位于细胞浆.结论 CA11为一胃癌下调基因,它在胃粘膜上皮细胞特异表达,表达产物定位于细胞浆.