6-磷酸果糖激酶基因pfkA在施氏假单胞菌中的异源表达及其表型分析

糖代谢在生命活动中具有重要意义，它保证了生物体生命活动所需的物质和能量的供应。葡萄糖作为自然界中普遍存在的最简单的单糖，是生物体的理想碳源。施氏假单胞菌( Pseudomonas stutzeri) A1501具有广泛的、典型的微生物代谢途径，但是该菌利用葡萄糖的效率很低。基因组分析表明A1501菌缺少糖酵解( EMP )途径中编码6￣磷酸果糖激酶的基因pfkA，初步认为这可能是A1501菌不能高效利用葡萄糖的原因。利用穿梭质粒pLAFR3将大肠杆菌的pfkA基因导入到施氏假单胞菌中，通过pfkA基因的异源表达重建A1501菌的EMP途径。测定了重组菌株的糖类代谢能力，结果表明pfkA基因的导入并没有赋予重组施氏假单胞菌更强的葡萄糖及其他糖类的利用能力，说明A1501菌葡萄糖利用的低效率除了缺乏pfkA外，还有其他的因素。研究也发现，导入pfkA的重组施氏假单胞菌对H2 O2高度敏感，推测pfkA导入重建后的EMP途径可能影响了该菌的还原力合成，导致菌体对氧化胁迫的耐受能力降低。