GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白

猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白.迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少.本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4.将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GST Pull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库.经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9.上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向.