当归生药中两种PR-10蛋白亚型的纯化与表征

为了进一步研究当归(Angelica sinensis)生药中的蛋白质及其功能,通过80％硫酸铵沉淀、Sephadex G-50凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose阴离子交换层析,首次从当归生药中纯化出两种分子量相近的蛋白(命名为ASPR-C-1和ASPR-C-2).ASPR-C-1和ASPR-C-2在SDS-PAGE上的分子量分别为17.33 kDa和17.18 kDa,在溶液中主要以单体形式存在,但会部分形成二聚体,二者均为糖蛋白,糖基含量分别为2.6％和8.2％.经基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFTM)鉴定发现ASPR-C-1和ASPR-C-2均为病程相关(Pathogenesis-related 10,PR-10)家族蛋白,且具有核糖核酸酶活性,比活分别为73.60 U/mg和146.76 U/mg.两种蛋白的最适pH相近,均为5.6左右,但最适温度不同,ASPR-C-1的为50℃,ASPR-C-2的为60℃.二者虽然在60℃下都表现出最大的酶活力稳定性,但在更高的处理温度(80-100℃)下,ASPR-C-1迅速失活,最终仅余20％左右活力,ASPR-C-2则表现出良好的热稳定性,最终仍有80％左右活力.此外,Fe2+对二者的酶活性具有激活作用,而Ca2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ag+、Cu2+、EDTA、DTT和SDS则会不同程度地抑制二者的酶活性.研究结果为深入研究来自当归生药的PR-10蛋白的生物学功能奠定了基础.