一株芽孢表面稳定展示海藻糖合酶工程菌的构建

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168-Tres基因组为模板,PCR扩增得到同源臂基因sleB1和cwlJ1,重叠PCR连接sleB1与卡那霉素抗性(km~r)基因,电转获得B.subtilis 168-Tres△sleB菌株,连接cwlJ1与博来霉素抗性(zeo~r)基因,电转获得B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ菌株。结果表明,经km~r、zeo~r抗性筛选及PCR鉴定,成功获得sleB、cwlJ,基因双缺失菌株B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ;发酵结果显示,B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ与出发菌株的芽孢形成率一致,约为88%;在LB固体培养基和麦芽糖转化生成海藻糖体系中B.subtilis168-Tres的芽孢萌发数为4.8×10~8 CFU/mL,B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ芽孢未萌发;在麦芽糖转化生成海藻糖体系中,重组菌海藻糖合酶酶活为10.42 U,比原始菌提高了78.7%。敲除sleB、cwlJ基因后,不影响枯草芽孢杆菌生成芽孢的量,但能有效控制芽孢在上述转化体系中的萌发,使芽孢表面稳定展示海藻糖合酶,提高了芽孢的利用率。