人脂肪源性间充质干细胞和富血小板血浆对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响

目的 探讨人脂肪源性间充质干细胞(ADSC)和富血小板血浆(PRP)对小鼠全层皮肤 缺损创面愈合的影响. 方法 取1名2018年2月在广州军区广州总医院整形外科接受吸脂手术的健康女性自愿捐赠的腰腹部脂肪,分离培养ADSC并进行鉴定,采用第2代细胞进行以下实验.抽取该志愿者静脉血,通过二次离心法得到PRP.将36只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为单纯损伤组12只、单纯ADSC治疗组12只、ADSC联合PRP治疗组12只,在每只小鼠背部制备1个1 cm×1 cm全层皮肤缺损创面.伤后即刻,单纯损伤组小鼠创而皮下注射1mL生理盐水,单纯ADSC治疗组小鼠创面皮下注射PBS混匀的ADSC悬液(浓度为5×105个/mL,下同)1mL,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面皮下注射PRP 与 ADSC按1∶2体积比混合的液体1mL.伤后3、5、7、14d,每组各取3只小鼠,观察创面大体情况并计算创面愈合率;伤后3、5、7 d,大体观察后切取未愈合创面组织及创缘周围0.5 cm正常皮肤组织,行苏木素-伊红染色观察组织炎症反应、再上皮化、血管新生情况并计算创面再上皮化率,行Masson染色观察组织胶原新生情况,另对伤后3、5 d标本采用免疫组织化学法观测巨噬细胞表达.对数据行析因设计方差分析、LSD检验. 结果 (1)伤后3 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面可见肉芽组织新生、红肿,其余2组小鼠创而红润、有渗液.伤后5d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面红肿减轻、干燥、结痂明显,其余2组小鼠创面红肿明显.伤后7 d,3组小鼠创面基本结痂.伤后14 d,3组小鼠创面痂皮脱落、基本愈合.伤后3、5、7、14 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面愈合率明显高于其余2组(P ＜0.05或P＜0.01);伤后5、7d,单纯ADSC治疗组小鼠创面愈合率明显高于单纯损伤组(P＜0.01).(2)伤后3d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面肉芽组织新生较其余2组多.伤后5 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面炎症反应较轻,其余2组小鼠创面炎症反应重.伤后7 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面几乎完成再上皮化过程,新生血管数多于其余2组;其余2组小鼠创缘再生上皮迁移距离较近.伤后3、5、7 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创而再上皮化率分别为(37.6±4.5)％、(59.1±1.3)％、(89.2±4.3)％,显著高于单纯损伤组的(25.7±1.5)％、(34.5±4.4)％、(50.8±2.7)％和单纯ADSC治疗组的(29.1±0.8)％、(42.6±2.9)％、(72.9±3.0)％(P＜0.01);伤后5、7d,单纯ADSC治疗组小鼠创面再上皮化率显著高于单纯损伤组(P＜0.05或P＜0.01).(3)伤后3、5d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面肉芽组织中有较多新生胶原纤维,其余2组小鼠创面组织中胶原纤维较少.伤后7 d,ADSC联合PRP治疗组小鼠创面肉芽组织减少,出现大量新生胶原纤维;单纯ADSC治疗组小鼠创面组织中胶原纤维增多;单纯损伤组创面组织中胶原纤维沉积仍较少.(4)伤后3、5 d,单纯ADSC治疗组小鼠创面组织中巨噬细胞数分别为(4.7±0.6)、(5.3±0.6)个,明显少于单纯损伤组的(6.3±0.6)、(7.7±0.6)个(P ＜0.05或P＜0.01);ADSC联合PRP治疗组小鼠创面组织中巨噬细胞数分别为(3.0±1.1)、(2.7±0.5)个,明显少于其余2组(P ＜0.05或P＜0.01). 结论 人PRP和ADSC参与小鼠全层皮肤缺损创面早期炎症和中期组织增殖以及后期再上皮化与塑形过程,ADSC和PRP联合治疗可能是提高创面愈合速度与质量的较佳组合方案.