重组小鼠Parkin共同调节基因在昆虫细胞系统中的表达

Zhonghua nan ke xue = National journal of andrology（2016）

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摘要

目的:构建小鼠Parkin co-regulated gene(Pacrg)/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体,并在Sf9昆虫细胞中表达. 方法:PCR扩增小鼠全长Pacrg编码cDNA序列,通过TA克隆、连接等方法将该基因插入到携带eGFP的供体质粒pFastBac1中,获得重组载体rpFBac-Pacrg-GFP,然后转化到DH10Bac宿主菌中.筛选获得的重组杆状病毒载体rBacmid-Pacrg-eGFP经脂质体转染至Sf9昆虫细胞中,荧光显微镜及Western印迹检测分析重组蛋白. 结果:经测序及酶切鉴定显示构建的Pacrg/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体正确,Western印迹结果显示PACRG/eGFP融合蛋白在Sf9昆虫细胞中表达且携带绿色荧光. 结论:成功构建了Pacrg/GFP-pFastBac1重组杆状病毒载体,且该重组蛋白在Sf9昆虫细胞中大量表达,为进一步研究PACRG蛋白的结构及其在精子发生中的调控作用奠定了基础.

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关键词

Parkin co-regulated gene (Pactg),baculovirus vector,eukaryotic expression,insect cell,spermatogenesis

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