下调MDA-MB-231乳腺癌细胞骨硬化蛋白(SOST)可增加间接共培养的MG-63成骨细胞的成骨作用

目的 构建靶向抑制骨硬化蛋白(SOST)基因的小干扰RNA (siRNA)腺病毒,感染MDA-MB-231乳腺癌细胞并与MG-63成骨细胞共培养,检测对成骨相关分子表达的影响.方法 针对SOST基因RNA序列设计带3个干扰片段的2对引物,以pB2B为模板,扩增“背靠背”排列的H1和U6启动子.两个PCR产物以Gibson DNA Assembly的方式同时连接腺病毒穿梭质粒pAdTrace-OK,经同源重组、HEK293细胞包装获得SOST-siRNA腺病毒.感染MDA-MB-231乳腺癌细胞,实时定量PCR检测SOST mRNA的表达水平,ELISA检测SOST蛋白水平.将转染该腺病毒的MDA-MB-231细胞与MG-63成骨细胞间接共培养,实时定量PCR检测护骨因子(OPG)、骨钙蛋白(OCN)、整合素结合涎蛋白(IBSP)、核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)的表达情况.结果 成功获得带3个干扰片段的腺病毒穿梭质粒,经同源重组和包装后,获得AdR-siSOST腺病毒.用该病毒感染MDA-MB-231细胞后,明显抑制SOST的表达.在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-siSOST腺病毒,能导致MG-63细胞的OPG、OCN、IBSP mRNA表达上升,RANKL mRNA降低.结论 在乳腺癌骨转移体外模型中感染Ad-siSOST腺病毒,能促进MG-63细胞的成骨分化,提高OPG/RANKL的比例.