二甲双胍对口腔鳞状细胞癌抑制作用的研究

目的 研究二甲双胍对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]、流式细胞术检测,使用不同浓度二甲双胍(2.5、5、10、20、40 mmol/L)处理OSCC细胞系(HSC-3、HSC-4)24、48、72 h后,检测药物对细胞增殖、克隆形成的影响;检测体内二甲双胍不同浓度(2、20、50 mmol/L)对细胞周期和凋亡的影响.采用小鼠皮下移植瘤模型,对比二甲双胍处理对小鼠肿瘤生长影响.共42只BALB/c小鼠分为对照组(水或磷酸盐缓冲液)和实验组(同时口服或预先口服、腹腔注射共6个亚组),每组各6只.从接种肿瘤开始,3d测量1次肿瘤大小,至实验结点共35 d,取出肿瘤组织制作切片并通过DNA末端转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)介导的dUTP缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)实验和免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达,评价二甲双胍对OSCC凋亡和增殖的影响.结果 分别采用5、10、20和40 mmol/L二甲双胍处理HSC-3和HSC-4细胞48和72h后MTT检测结果显示细胞增殖均减少,72h后克隆形成被明显抑制;TUNEL结果显示经50 mmol/L二甲双胍药物处理后细胞凋亡率增加到30％(对照组低于5％);小鼠体内实验结果显示,预先或同时口服二甲双胍的小鼠肿瘤体积较对照组分别下降了82.5％和63.9％,腹腔注射组比对照组肿瘤体积减小62.8％.小鼠肿瘤组织TUNEL检测结果显示,使用过二甲双胍小鼠的肿瘤组织细胞凋亡率增加,口服药物组分别为50％(同时口服)和70％(预先口服),腹腔注射组为25％,而两组对照均低于10％;免疫组织化学染色检测PCNA的表达下降,以对照组为100％计算,实验组PCNA阳性细胞均低于60％.以上结果实验组与对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 二甲双胍可通过抑制OSCC细胞的增殖和克隆形成、促进细胞凋亡,在体外内抑制HSC-3和HSC-4细胞系的生长和增殖,具有作为肿瘤临床治疗辅助用药的潜力.