miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其机制研究

探究miR-206/miR-613对OATP1B1基因和蛋白表达的影响及其调控机制.通过生物信息学软件预测可靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-qPCR和Western blot等分子生物学方法检测miR-206/miR-613、OATP1B1 mRNA及蛋白表达水平;采用双荧光报告基因法,研究miR-206/miR-613作用于OATP 1B1表达的确切机制.结果发现,miR-206/miR-613种子序列与OATP 1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,具有较高的特异性,且它们之间形成的二级结构较为稳定.与对照组相比,过表达miR-206/miR-613,HepG2细胞中OATP1B1的蛋白表达水平分别下调24.7％、38.8％,反之,抑制其表达OATP1B1的蛋白表达水平分别上调25％、38.2％,而OATP 1B1 mRNA表达均未发现明显改变;与对照组相比,过表达或抑制表达miR-206/miR-613,pMIR/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性分别下降35％、30％或增加33.1％、32.5％,而在OATP 1B1 mRNA3'-UTR miR-206/miR-613结合位点突变的报告基因系统中,过表达或抑制表达miR-206/miR-613对荧光素酶活性均无影响.因此,miR-206/miR-613通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR,从而转录后调控OATP1B1蛋白表达.