用小鼠模型分析可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A的免疫原性

[目的]可溶性表达结核分枝杆菌Ag85A蛋白,并评价其免疫原性.[方法]利用冷休克表达质粒和含有伴侣质粒的大肠杆菌对Ag85A蛋白进行可溶性原核表达,并进行纯化与鉴定,通过C57BL/6小鼠模型对Ag85A蛋白的免疫原性,包括诱导机体特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平进行分析.[结果]重组菌诱导后裂解上清中检测到可溶性Ag85A蛋白的表达,经过亲和层析纯化收获了纯度在90％以上的Ag85A蛋白,Westem blot鉴定显示其具有较好的免疫反应性.Ag85A蛋白免疫小鼠后,血清中可以检测到高水平的IgG抗体效价,其中IgG2b水平要高于IgG1.通过特异性多肽、蛋白刺激脾脏和腹股沟淋巴结细胞可分泌高水平的IFN-γ、 TNF-α等Th1型细胞因子.[结论]实现了Ag85A蛋白的可溶性表达,免疫特性评价显示Ag85A蛋白可诱导机体产生强烈的特异性体液免疫应答及Th1型的细胞免疫应答,从而为其进一步免疫学功能的研究奠定了重要基础.