刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆表达及鉴定

目的：克隆刚地弓形虫硫氧还蛋白（Thioredoxin，Trx）基因，构建原核表达载体，通过诱导表达和纯化蛋白，免疫家兔制备多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增刚地弓形虫Trx基因，克隆至原核表达载体pET?28a（+）中，转化大肠埃希菌（E. coli）Rosetta，用IPTG诱导目的蛋白表达，采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blotting技术鉴定多克隆抗体的特异性。结果成功从刚地弓形虫cDNA中扩增出Trx目的基因，构建了Trx/pET?28a（+）重组质粒，获得抗Trx重组蛋白的多克隆抗体。Western blotting技术检测出弓形虫Trx蛋白的特异性条带。结论用制备的兔抗Trx多克隆抗体能检测弓形虫Trx在速殖子内的表达，为进一步深入研究刚地弓形虫Trx功能奠定了基础。