RITA协同替莫唑胺抑制人脑胶质瘤U87细胞的生长

目的：探讨p53靶向小分子RITA，替莫唑胺（TMZ）以及二者联用对人脑胶质瘤细胞U87的增殖、克隆形成和凋亡等的影响及其可能机制。方法采用MTS法分别检测0、1、5、10、20μmol/L的RITA、TMZ和半剂量的RITA+TMZ作用于U87细胞0、24、48、72 h的细胞增殖情况，计算增殖率和抑制率，金正均法进行药物联用效果评价；qRT-PCR法和蛋白质印迹法分别检测p53和p21等肿瘤凋亡相关基因的mRNA和蛋白质表达水平；流式细胞术Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡；结晶紫染色检测细胞克隆形成。结果 MTS结果显示，RITA对U87细胞抑制作用明显，且显著强于TMZ（72 h，4个浓度对比P=0.000），1~20μmol/L的RITA、TMZ作用72h抑制率分别为25.94%~41.38%、3.84%~8.20%；二者联用细胞抑制率高于RITA （P<0.01）、TMZ单用（P=0.000），抑制率为29.21%~52.11%，抑制作用更显著。金正均法计算q值，半剂量RITA和TMZ联合给药48 h后，浓度高于5μmol/L时q值均大于1.2，药物联用表现为协同效应；RITA和TMZ均能促进p53，p21和puma等凋亡相关基因的表达，促进细胞凋亡，抑制细胞生长和克隆形成，且效果为RITA+TMZ>单用RITA>单用TMZ。结论 RITA可通过上调p53的表达发挥抑癌作用并提高人脑胶质瘤细胞对TMZ的敏感性，使二者联用具有明显的协同作用。本研究为进一步深入探索RITA在脑胶质瘤治疗中的应用及与TMZ联用后药效提高机制提供了参考。