富氢水对创伤性脑损伤大鼠Nrf2表达及氧化应激损伤的影响

目的 探讨富氢水对创伤性脑损伤(TBI)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)表达及氧化应激损伤的影响.方法 将90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI组、富氢水干预组,每组30只.采用改良Feeney法自由落体撞击制作TBI模型;假手术组开颅窗后不撞击.富氢水干预组撞击致脑损伤后腹腔注射富氢水5 mL/kg,每日1次,共5d;假手术组和TBI组给予等量生理盐水.各组分别于术后6、12、24、48 h和5d时取6只大鼠进行神经功能缺损评分(NSS),活杀后取损伤灶周边皮质脑组织备检.分光光度法检测过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Nrf2 mRNA和核蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理学改变.结果 ①NSS评分:富氢水干预组术后12、24、48 h和5d时NSS评分(分)较TBI组明显下降(12 h:9.83±2.32比13.17±2.71,24 h:9.83±2.79比13.50±2.43,48h:7.50±2.07比11.83±2.14,5 d:5.50±1.87比10.50±2.43,均P＜ 0.05).②TBI术后CAT、GSH-Px明显低于假手术组,MDA明显高于假手术组,以24h时最为明显[CAT (kU/g):1.080±0.312比3.571±0.758,GSH-Px(kU/g):9.195±3.173比32.385±10.619,MDA(μmol/g):12.282±2.896比4.349±1.511,均P＜0.01];富氢水干预组各项指标均明显改善,接近假手术组水平.③RT-qPCR:3组各时间点Nrf2 mRNA表达差异均无统计学意义.④Western Blot:TBI组术后脑组织Nrf2核蛋白表达(灰度值)较假手术组明显上升,24 h达高峰(0.703±0.262比0.238±0.120,P＜0.05);富氢水干预组术后Nrf2核蛋白表达明显高于TBI组,以24h时最为明显(1.110±0.372比0.703±0.262,P＜0.05).⑤HE染色:假手术组脑组织结构完整;TBI组各时间点出现不同程度的脑损伤,以24h时损伤最为明显;富氢水干预组损伤较TBI组明显减轻.结论 富氢水可上调TBI大鼠脑组织Nrf2表达,减轻脑组织氧化应激损伤,其机制可能与Nrf2诱导其下游抗氧化物酶表达有关.