肺炎链球菌溶血素经死亡受体/Fas途径和线粒体途径诱导RAW264.7细胞凋亡

目的:探讨肺炎链球菌溶血素( Pneumolysin,Ply)对小鼠RAW264.7细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及机制.方法:Ply蛋白加入RAW264.7细胞培养上清与细胞共孵育.倒置显微镜观察Ply对RAW264.7细胞形态的影响.MTT 法检测Ply对RAW264.7细胞的增殖抑制.Annexin V法检测细胞凋亡率.分光光度法检测Caspase-3、8、9活性.免疫细胞化学法检测到Bax、Fas、Bcl-2蛋白的表达.结果:Ply对小鼠RAW264.7细胞有明显的增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性；lμg/ml Ply处理RAW264.7细胞24小时后,可见典型的凋亡形态学改变；1μg/ml Ply处理RAW264.7细胞1小时和3小时后,细胞凋亡率分别为32.90％和51.56％ (P ＜0.05)；1μg/ml Ply蛋白处理RAW264.7细胞24小时,Caspase-3、8、9活性均比对照组升高(P＜0.05)；免疫细胞化学法检测到Bax、Fas表达较对照组增强,Bcl-2表达减弱(P＜0.01).结论:Ply可诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡,诱导凋亡的机制可能是通过死亡受体/Fas途径和线粒体途径双重机制的介导实现.