基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin治疗肝癌的实验研究

目的探讨一种新的基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin(简称CNHK300-mE)对肝癌的治疗作用.方法利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因-病毒治疗系统;通过50%组织培养感染剂量(TCID50)方法和细胞活性检测法四氮唑盐比色试验(MTT法)观察CNHK300-mE在2种肝癌细胞株(HepGII及Hep3B)及1株正常的成纤维细胞株(MRC-5)中的病毒增殖能力和对细胞的杀灭能力;通过肝癌SMMC 7721细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒对肝癌生长和对肿瘤血管生成的抑制作用;利用Western印迹法和酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测内皮抑素基因在体内和体外的表达.结果分别感染肝癌细胞株和正常细胞株96 h后病毒的增殖倍数相差3296倍,其达到半数杀伤量(ED50)时的感染复数(MOI)值相差25倍,差异有显著意义,且两者均明显优于ONYX-015;CNHK300-mE能明显抑制肝癌皮下移植瘤内血管的生成,对肿瘤生长的抑制作用与携带同一治疗基因的非增殖型腺病毒和不携带治疗基因的增殖型腺病毒ONYX-015相比均增强(P均<0.01);其所介导的内皮抑素基因在体内和体外的表达量均与携带该基因的非增殖型腺病毒载体相比均增高(P<0.05和P<0.005).结论 CNHK300-mE是一种能在端粒酶阳性的肝癌细胞株中特异性增殖并杀灭肿瘤细胞的基因-病毒治疗系统,它既具有肿瘤增殖病毒在肿瘤细胞内特异性增殖的能力,又具有高效表达抗癌基因的能力,对肝癌生长具有很强的抑制作用,是一种具备治疗肝癌潜力的新型基因-病毒治疗系统.