新型表皮生长因子受体异构体EGFRvA对胶质瘤U87MG细胞迁移的影响及其机制探讨

目的:研究新型表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)异构体EGFRvA对人恶性胶质瘤U87MG细胞迁移的影响,并深入探讨其可能的机制.方法:首先将pWPT-GFP[重组有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因,作为空白对照]、pWPT-EGFRwt(重组有野生型EGFR基因,作为阴性对照)和pWPT-EGFRvA慢病毒表达载体分别与慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G一起共转染293T细胞,获得慢病毒颗粒,然后感染胶质瘤U87MG细胞,建立U87MG GFP、U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞系.采用蛋白质印迹法和FCM法验证EGFRwt和EGFRvA分别在感染后的U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞中成功过表达.采用Transwell小室实验检测各组细胞迁移能力的变化.实时荧光定量PCR法验证前期基因芯片技术筛选出的各组细胞之间表达水平有明显变化的52个基因的mRNA水平,并用蛋白质印迹法检测其中4个有显著差异的肿瘤转移相关基因的蛋白表达水平.结果:稳定感染U87MG细胞后,U87MG EGFRwt和U87MG EGFRvA细胞中分别过表达EGFRwt和EGFRvA.相对于EGFRwt过表达组,过表达的EGFRvA更能促进U87MG细胞发生迁移(P＜0.001).U87MG EGFRvA细胞中癌基因FBLN2和ROBO1的mRNA水平高于U87MG EGFRwt细胞,而抑癌基因CDH13和SOX2的mRNA水平则明显下调(P值均＜ 0.05).在蛋白质水平上,U87MG EGFRvA细胞中与肿瘤转移相关的CDH13和SOX2表达水平也明显下调(P值均＜0.05).结论:EGFRvA过表达可以促进人胶质瘤U87MG细胞的迁移,它可能是通过影响肿瘤细胞中FBLN2、ROBO1、CDH13和SOX2基因的表达来发挥作用.