重组腺病毒Ad-绿色荧光蛋白/干细胞白血病基因的构建及在Cajal间质细胞缺失模型鼠体内的分布和表达

目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)标记的人干细胞白血病基因(SCL)重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞(ICC)缺失模型鼠体内的分布和表达,为进一步研究慢传输型便秘(STC)的基因治疗奠定基础.方法 利用Ad-Easy系统、细菌内同源重组法快速构建重组腺病毒Ad-GFP/SCL.经尾静脉注射1.6×109 PFU的重组腺病毒给ICC缺失模型Balb/c小鼠,在不同的时相点检测重组腺病毒在小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内的分布和表达;苏木精-伊红染色法观察重组腺病毒的体内毒性;RT-PCR法分析重组腺病毒介导的SCL mRNA在各脏器内的表达.结果 通过荧光显微镜观察,在不同时期可以观察到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内有不同程度的GFP表达:苏木精-伊红染色法显示各脏器未见明显毒性反应;RT-PCR法分析显示各脏器均有不同程度的SCL mRNA表达.结论 成功构建的重组腺病毒Ad-GFP/SCL可介导SCL基因在ICC缺失模型Balb/c小鼠体内安全、稳定地表达,为进一步在体研究STC的基因治疗奠定了基础.