药用真菌猪苓4种小GTPase基因的克隆和表达分析

利用RACE-PCR技术首次从药用真菌猪苓中分离得到猪苓菌核的4个小GTPase基因.这4个基因分别命名为PuRhoA1、PuRhoA2、Puypt1及PuRas,PuRhoA1全长698 bp,编码区共585 bp,编码194个氨基酸,推测分子量为21.75kD,理论等电点为6.44;PuRhoA2全长837 bp,其中编码区长585 bp,可编码194个氨基酸,计算其分子量为21.75kD,理论等电点为6.33;Puypt1为一条896 bp的cDNA,编码区为615 bp,可编码204个氨基酸,经计算分子量为22.556kD,理论等电点为5.75.PuRas的cDNA全长为803 bp,其中编码区长639 bp,编码212个氨基酸,推测分子量为23.821kD,理论等电点为5.2.PuRhoA1具有法尼酰转移酶催化位点(FT-CaaX)和香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-CaaX),而PuRhoA2仅具有香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-CaaX);Puypt1具有小GTPase家族中Rab1-Ypt1的完整保守结构域;PuRas具有法尼酰转移酶催化位点(FT-CaaX).系统进化树结果显示猪苓的4个小GTPase都隶属于担子菌类群.实时荧光定量PCR分析结果表明在菌核形成初期Puypt1、PuRas、PuRhoA1在菌核中表达量显著高于菌丝,而PuRhoA2在菌核中的表达量显著低于菌丝,说明这4个小GTPase基因可能参与了猪苓菌核的形态发生.