肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对荚膜多糖的调控作用

[目的]研究肺炎链球菌糖代谢蛋白CcpA对肺炎链球菌荚膜多糖(CPS)的调控作用.[方法]利用大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)工程菌原核表达CcpA蛋白,使用Ni2+亲和层析的方法纯化蛋白.利用纯化后的CcpA蛋白免疫昆明小鼠并制备多克隆抗体;采用ELISA法测定抗CcpA抗体效价.随后,利用Westertn blot方法分析CcpA蛋白在肺炎链球菌中的保守性.另外,利用EMSA方法分析CcpA与cps基因座启动子区域片段的结合.最后,构建ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株;利用ELISA法测定野生D39菌株、ccpA基因缺失株和ccpA基因回复株的荚膜多糖含量.[结果]Western blot结果显示CcpA蛋白在多种血清型的肺炎链球菌均有表达,CcpA蛋白可与cps基因座启动子区域结合,且呈剂量依赖性;ccpA基因缺失时,细菌CPS含量升高,回复表达CcpA蛋白后,CPS含量显著降低.[结论]CcpA是肺炎链球菌中一种保守表达的蛋白,可通过调节cps基因座启动子负性调控肺炎链球菌荚膜多糖的表达.