依达拉奉对Aβ25-35诱导的PC12细胞MAPKs信号通路的影响

目的 探讨自由基清除剂依达拉奉通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路发挥细胞保护作用的途径,为阿尔茨海默病(AD)发病机制及AD治疗新药的研发增添理论依据.方法 培养肾上腺嗜铬瘤细胞(PC12细胞),根据不同的干预措施将细胞分为4组.阴性对照组(高糖DMEM组);AD模型组(30 μmol/LAβ25-35处理组);抑制剂对照组:10 μmol/L SB203580[丝裂原活化蛋白激酶p38(p38)抑制剂]、10 μmol/L SP600125[c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂]或10 μmol/L PD98059[细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂]处理组;依达拉奉低、中、高剂量组:依达拉奉20、40、80μmol/L及30 μmol/L Aβ25 35共同孵育组.Western blot检测各组细胞p-p38、p-JNK及p-ERK蛋白的表达;RT-PCR法检测以上各组(抑制剂对照组仅加入SB203580 10 μmol/L)p38 mRNA的表达.结果 ①与阴性对照组比,AD模型组p-p38蛋白表达增高(P＜0.01);与AD模型组比,抑制剂对照组和依达拉奉各组p-p38蛋白的表达减低(P＜0.05);依达拉奉3组的p-p38蛋白表达高于抑制剂对照组(P＜0.05),与低剂量依达拉奉组比,中剂量依达拉奉组p-p38蛋白有所减低(P＜0.05).②与阴性对照组比,AD模型组p-JNK蛋白表达增高(P＜0.05);与AD模型组比,抑制剂对照组p-JNK蛋白的表达减低(P＜0.05).③p-ERK表达在各组之间差异无统计学意义(P＞0.05).④与阴性对照组比,AD模型组的p38mRNA表达增加,而抑制剂对照组的p38 mRNA表达减少(分别P＜0.05);中、高剂量依达拉奉组p38 mRNA表达比AD模型组减低,且比抑制剂对照组还低(P＜0.05);以40 μmol/L依达拉奉组p38 mRNA表达最低,与20 μmol/L、80 μmol/L依达拉奉组均明显不同(P＜0.05).结论 Aβ25-35可能直接激活MAPK信号通路,尤其p38及JNK,损伤PC12细胞.依达拉奉可能同时在mRNA水平及蛋白质水平,阻断p38信号转导通路,发挥抗Ap25-35引起的PC12细胞损伤作用,有望成为治疗AD的新药.