骨桥蛋白对人膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响

目的 探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)对人膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶13 (matrix metalloproteinase 13,MMP-13)表达的影响,并确定OPN干预的最佳时间和浓度.方法 采用原发膝骨关节炎患者自愿捐赠的膝关节软骨,Ⅱ型胶原酶一步消化法分离培养软骨细胞,并行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色鉴定.取第1代软骨细胞,分别以1 μg/mL浓度的OPN干预培养0、24、48、72 h,以及0、0.5、1、2、4μg/mL浓度的OPN干预培养48 h;实时荧光定量PCR和Western blot检测MMP-13 mRNA和蛋白表达水平.结果 免疫组织化学染色鉴定示Ⅱ型胶原染色呈阳性.经1 μg/mL OPN干预培养后,软骨细胞MMP-13 mRNA及蛋白表达水平均呈升高趋势,48 h时达峰值,各时间点间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度OPN干预培养48 h后,1μg/mL组MMP-13 mRNA表达水平较其余组显著上升(P＜0.05),蛋白表达水平亦显著升高,但仅与0 μg/mL比较差异有统计学意义(P＜0.05);0.5、2、4μg/mL组仅MMP-13蛋白较0μg/mL组显著上升,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 OPN可明显上调人膝骨关节炎软骨细胞MMP-13表达,且具备时间和浓度依赖性,干预最佳时间及浓度分别为48 h及1μg/mL.