日本血吸虫VCP基因的克隆表达及其在不同生活史期的mRNA表达水平

目的：从原核表达日本血吸虫含缬酪肽蛋白（VCP）基因，并分析其在不同生活史期的mRNA表达水平。方法提取日本血吸虫虫卵RNA，逆转录为cDNA，PCR扩增日本血吸虫VCP基因，亚克隆至原核表达载体pET15b；重组质粒转化入E. coli BL21，异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导目的基因表达，并采用包涵体纯化方法获取重组蛋白，产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行分析鉴定。提取日本血吸虫尾蚴、童虫、雌虫、雄虫、虫卵RNA，DNase消化，纯化后逆转录为cDNA，采用荧光实时定量PCR分析VCP基因在上述生活史期的表达水平。结果 PCR扩增获得日本血吸虫VCP基因，经重组质粒表达和包涵体纯化成功获得重组蛋白。荧光实时定量PCR检测发现，日本血吸虫VCP基因在尾蚴中的mRNA表达水平最高，在童虫、虫卵、雄虫、雌虫中表达水平较低。结论获得日本血吸虫VCP基因编码的重组蛋白；日本血吸虫VCP基因mRNA在尾蚴阶段表达水平最高，在童虫、虫卵、雄虫、雌虫中表达水平较低。。