PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立

目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系.方法:首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参.结果:在白花丹参MS +6-BA 1.5 mg·L-1 +NAA0.1mg·L-1固体分化培养基中附加20 g·L-1-甘露糖和10g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7％,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入.结论:建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础.