抗木瓜凝乳蛋白酶单链抗体基因的构建、初步筛选和鉴定
Xi bao yu fen zi mian yi xue za zhi = Chinese journal of cellular and molecular immunology（2004）
摘要
目的: 构建抗木瓜凝乳蛋白酶全套单链抗体(scFv)噬菌体表面展示文库.方法: 从木瓜凝乳蛋白酶免疫小鼠的淋巴细胞中提取总RNA, 反转录成cDNA后, 用抗体V区简并引物扩增全套VH和VL基因.经重叠延伸反应, 装配成scFv基因, 并将其克隆到噬粒载体pFAB5C中, 构建scFv噬菌体抗体库.对抗体库进行亲和筛选后, 用ELISA法鉴定抗木瓜凝乳蛋白酶的scFv.结果: 经4轮"亲和-吸附-洗脱"的富集过程, 得到ELISA活性较高可与木瓜凝乳蛋白酶结合的克隆.结论: 成功地构建了抗木瓜凝乳蛋白酶的scFv噬菌体展示文库, 并筛选到与木瓜凝乳蛋白酶具有结合能力的scFv基因.
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