高渗条件下RpoE与RpoS调节因子共同影响伤寒沙门菌生长代谢

目的 了解RpoE和RpoS调节因子在高渗应激下是否共同调节伤寒沙门菌的代谢生长.方法 运用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌rpoS/rpoE双缺失突变株,用PCR观察重组现象；以吸光度值(A600值)为纵坐标,培养时间为横坐标绘制生长曲线,观察细菌在高渗条件下的生存能力,分析其在对数生长早期(4 h)和对数生长晚期(12 h)的生长差异；利用伤寒沙门菌全基因组芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和各基因缺失突变株代谢相关基因在高渗应激下的表达差异,选择部分差异表达基因利用实时定量RT-PCR进一步验证.结果 成功制备伤寒沙门菌rpoS/rpoE双缺失突变株.生长曲线分析发现,rpoS缺失突变株在生长4h和12 h的A600值分别为0.503±0.018和2.060±0.112,rpoE缺失突变株分别为0.293±0.053和1.933±0.115,rpoS/rpoE双缺失突变株分别为0.051±0.007和0.963±0.111,均低于野生株的0.725±0.097和2.496±0.171,差异具有统计学意义(P＜0.05).全基因组芯片筛选到42个受RpoE、RpoS调节的涉及代谢的基因.实时定量PCR结果发现,rpsE、rbsK、nusG、etuB在rpoS缺失突变株中的表达分别为(1.86±0.14)×106、(1.37±0.11)×106、(2.72±0.58)×106、(8.27±1.01)×106拷贝/μg,在rpoE缺失突变株中的表达分别为(2.19±0.17)×106、(1.51±0.12)×106、(2.73±0.57)×106、(9.63±1.42)×106拷贝/μg,与野生株中相应基因表达比较[分别为(1.94 ±0.10)×106、(1.52±0.11)×106、(2.39±0.52)×106、(10.83±1.52)×106拷贝/μg],差异无统计学意义(P＞ 0.05)；与rpoS/rpoE双缺失突变株比较[分别为(5.64±0.59)×106、(4.17±0.40)×106、(9.44±1.22)×106、(2.95±0.88)×106拷贝/μg],差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 RpoE与RpoS能够影响大量代谢相关基因的表达,共同调控伤寒沙门菌在高渗应激下的代谢生长.