H2S对氧化型低密度脂蛋白诱导人单核巨噬细胞核转录因子-κB的影响及机制

目的:研究硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导人单核巨噬细胞NF-κB通路的调节作用及其机制.方法:人单核细胞系THP-1细胞采用12-豆蔻酸-13-乙酸佛波醇(phorbol myristate acetate,PMA)诱导分化为巨噬细胞后,分为4组:对照组、ox-LDL组、ox-LDL+H2S100μmol/L组及ox-LDL+H2S 500 μmol/L组.用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达及NF-κB磷酸化水平,激光共聚焦法检测细胞胞浆IκBα及NF-κB的核转位改变,免疫共沉淀方法检测细胞核中NF-κB p65与IκBα结合情况.结果:Western blot结果显示,与对照组相比,ox-LDL组人单核巨噬细胞中NF-κB p65磷酸化水平明显升高(0.855 ±0.116 vs.0.502 ±0.218,P=0.046),IκBα表达明显减少(0.612 ±0.216 vs.0.997±0.167,P=0.029)；与ox-LDL组相比,ox-LDL+H2S 100 μmol/L组及ox-LDL+H2S 500 μmol/L组细胞中NF-κB p65磷酸化水平显著降低(0.424 ±0.225 vs.0.855±0.116,P=0.020; 0.378 ±0.071 vs.0.855±0.116,P=0.011),IκBo表达显著增多(1.037 ±0.111 vs.0.612 ±0.216,P=0.015;1.046±0.084 vs.0.612±0.216,P=0.013).激光共聚焦结果显示:与对照组相比,ox-LDL组THP-1源性巨噬细胞胞浆中IκBα表达明显降低,NF-κB p65核转位明显增加；与ox-LDL组相比,ox-LDL+H2S 100 μmol/L组及ox-LDL+H2S 500 μmol/L组细胞胞浆IκBα表达显著增多,NF-κBp65核转位明显减少.免疫共沉淀结果显示,对照组人单核巨噬细胞胞核内未检测到NF-κB p65与IκBα的结合,ox-LDL组细胞核内NF-κB p65与IκBα结合较少,ox-LDL+H2S 100 μmol/L组及ox-LDL+H2S 500 μmol/L组细胞核内NF-κB与IκBα结合明显增多.结论:H2S可抑制ox-LDL诱导人单核巨噬细胞中NF-κB通路激活,其作用机制可能与抑制胞浆中IκBα降解,减少NF-κB p65磷酸化激活及核转位,同时可促进胞核中IκBα与NF-κB的结合,进而抑制NF-κB的活性有关.