大鼠糖原合成酶激酶3β过表达及糖原合成酶激酶3β抑制剂SB-216763对肝卵圆细胞增殖的影响

目的 研究糖原合成酶激酶(GSK)3β过表达及GSK3β抑制剂SB-216763通过Wnt通路对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响及其调控机制.方法 肝卵圆细胞WBF-344分为空白对照组、GSK3β过表达慢病毒组(过表达组)、二甲基亚砜对照组和GSK3β抑制剂组,抑制剂组设1、5、10 u.mol/L 3个浓度梯度.以鉴定正确的GSK3β过表达慢病毒和不同浓度SB-216763处理WBF-344细胞,相差及荧光显微镜分别观察细胞形态及慢病毒组细胞荧光表达量；CCK8检测细胞增殖,Annexin V-碘化丙啶检测细胞凋亡;Western blot法检测GSK3β、β-catenin及cyclin DI蛋白表达.结果 镜下见GSK3β过表达组细胞较少,老化明显,且出现大量绿色荧光；各抑制剂组细胞分裂旺盛,状态良好,且细胞数随SB-216763浓度升高而增多.CCK8及流式细胞术显示GSK3β过表达组细胞增殖减慢(t=7.178,P＜0.01),凋亡明显,抑制剂组增殖加快(F =45.030,P ＜0.01).Western blot 法显示过表达组GSK3β呈高表达趋势,3-catenin和cyclin D1表达减弱,抑制剂组GSK3β表达量无明显差别,但随抑制剂浓度增高,β-catenin和cyclin D1表达增强.结论 GSK3β过表达可下调Wnt通路使细胞增殖减慢,促进凋亡.GSK3β抑制剂能激活Wnt通路促进细胞增殖.