高效表达重组HIV-1 gp41及在尿液检测中的应用

目的 应用优化的HIV-1 gp41基因,通过原核表达得到高纯度的重组HIV-1 gp41抗原,制备基于重组gp41抗原的尿液HIV-1抗体检测试剂盒,并评价此试剂盒在尿液抗体检测中的灵敏度和特异性.方法 将编码HIV-1B亚型gp41主要抗原表位的基因插入到原核表达载体pET22b中,构建表达质粒pET22b-mgp41.将表达质粒转化B121(DE3)后经IPTG诱导其表达重组抗原rgp41.重组抗原经镍离子亲和层析和分子筛层析得到纯化.将纯化后重组抗原包被ELISA板,对4796份正常人群尿液、641份HIV-1抗体阳件感染者尿液进行HIV-1抗体检测.结果重组抗原经纯化后纯度95%.用本实验中制备的HIV-1抗体尿液检测试剂盒的检测结果显示,此试剂盒灵敏度为100%,特异性为98.52%.结论 本研究中制备的HIV-1尿液诊断试剂盒可以满足HIV感染者初筛实验的需要.