内皮素1过表达经Akt/PKB信号通路抑制大鼠肺细小动脉平滑肌细胞凋亡的体外研究

目的 探讨过表达内皮素1(ET-1)对体外培养的大鼠肺细小动脉平滑肌细胞(RPMC)凋亡的影响及其作用机制.方法 采用组织灌注法体外分离和培养原代RPMC,经免疫荧光法和电镜鉴定后,脂质体法瞬时转染ET-1基因,用流式细胞技术检测细胞周期和凋亡,免疫印迹法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt/PKB)的磷酸化水平和剪切的半胱天冬酶-3(Caspase-3)的表达.结果 成功分离和培养出原代RPMC,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测显示,RPMC中ETA受体mRNA表达水平明显高于ETB受体.瞬时转染ET-1基因48 h后,流式细胞仪结果显示,与空载相比,RPMC的凋亡明显下降.免疫印迹法检测显示,过表达ET-1后,Akt/PKB的磷酸化水平升高,剪切的Caspase-3的表达水平下降.结论 过表达ET-1可能主要通过ETA受体,并经Akt/PKB-Caspase-3信号通路抑制RPMC的凋亡,从而在肺动脉高压的血管重塑过程中发挥重要作用.