原癌基因LMO2短剪切模式的结合蛋白鉴定及功能分析

目的 研究原癌基因LMO2短剪切模式(LMO2-C)的结合蛋白在白血病细胞K562中的表达及功能分析.方法 利用麦芽糖结合蛋白(MBP)沉淀技术和哺乳动物双杂交技术研究LMO2-C的结合蛋白在K562细胞中的表达;半定量RT-PCR检测过表达LMO2-C的K562细胞中红系发育的标志性基因GPA的表达水平.结果MBP原核表达系统成功表达并被纯化出可溶性MBP-LMO2-C结合蛋白,利用MBP沉淀技术验证了LMO2-C能与K562细胞中内源性的GATA-1、LDB1结合;哺乳动物双杂交试验进一步证明LMO2-C能与LDB1结合,而且其过表达能够抑制LMO2-L与LDB1的结合,抑制率达(81.13±0.68)%;半定量RT-PCR结果显示在过表达LMO2-C的K562细胞中,GPA基因相对表达水平下调(51.00±1.58)%.结论LMO2-C能结合K562细胞中内源性GATA-1、LDB1蛋白,并能下调红系发育的标志性基因GPA的表达.