靶向survivin的小干扰RNA对HCCLM6细胞恶性表型的影响

目的 研究survivin基因在肝癌细胞中的表达水平及survivin小干扰RNA对高侵袭潜能人肝癌细胞HCCLM6恶性表型的影响.方法 收集4种人肝癌细胞株,以RT-PCR和Western blot检测survivin蛋白质表达,进而筛选出高表达survivin基因的肝癌细胞.构建针对survivin mRNA的干扰质粒pshRNA-survivin及阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-NC,并将其转染HCCLM6细胞.实时荧光定量PCR检测survivin mRNA表达量的变化情况;肿瘤细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变及Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭力的改变. 结果 4种肝癌细胞随侵袭能力升高survivin mRNA表达水平依次升高(P＜0.05),HCCLM6细胞survivin表达水平最高;Western blot结果与RT-PCR结果一致.HCCLM6细胞转染pshRNA-survivin后,survivin mRNA表达量明显下降,抑制率达93.500%±3.117%,与转染阴性对照质粒组(8.215%±0.797%)相比,差异有统计学意义(t=70.852,P＜0.01).细胞黏附实验结果显示,survivin重组质粒转染组黏附率为11.403%±1.256%,阴性对照组为32.545%±1.367%(t=20.732,P＜0.01).Matrigel侵袭实验结果显示,与阴性对照组[(32.6±1.4)]个相比,转染pshRNA-survivin后,细胞侵袭力明显下降[(13.5±0.9)个,t=14.5,P＜0.01].结论 Survivin与肝癌侵袭转移等恶性生物学行为有关,并随侵袭转移潜能升高表达水平升高.pshRNA-survivin可以特异性抑制高侵袭肝癌细胞HCCLM6中survivin表达,并显著降低其侵袭、黏附能力,小干扰RNA技术有望成为抑制肝癌侵袭转移的新途径.