Ad-hOSM转基因饲养层细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞增殖及归巢能力的影响

目的:建立转人抑瘤素M(hOSM)基因腺病毒载体的饲养层细胞, 观察转基因细胞对脐血CD34+ 造血干/祖细胞扩增的影响, 比较扩增前、后造血干/祖细胞体外迁移能力的变化.方法:建立转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞.并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+ 造血干/祖细胞, 流式细胞术(FCM)检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养, FCM检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验(Transwell 实验)检测自发迁移率和SDF-1诱导迁移率以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力.结果:建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光, RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达, 免疫磁珠法分离的脐血CD34+ 造血干/祖细胞纯度可达(96. 8±2. 28)%, 与Ad-hOSM转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可扩增15. 73倍, 表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高, 培养后的细胞用Transwell板做体外迁移实验, 与转基因饲养层细胞共培养的干细胞, 其诱导迁移率为(40. 68±1. 35)%, 明显高于对照组,可以较好的保持其归巢能力.结论:转hOSM基因腺病毒载体的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+ 造血干/祖细胞, 延缓其分化, 并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力.