乙型肝炎病毒X蛋白对小鼠足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达的影响

目的 乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)所引起的膜性肾病与原发膜性肾病有所区别,其肾组织中攻膜复合物(C5b-9)阳性率显著低于原发膜性肾病,说明在乙型肝炎病毒相关性膜性肾病(HBV-MN)中补体的活动受到某种抑制,产生这种差异的机制尚不清楚.本研究旨在探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否影响足细胞补体调节蛋白CD59和Crry表达,从而抑制补体活化.方法 培养的小鼠足细胞分为腺病毒载体乙型肝炎病毒X基因(Ad-HBx)转染组(Ad-X组)、空白足细胞组(B组)和腺病毒空载体转染组(Ad组),P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂(SB203580,LY294002,U0126)及二甲基亚砜(DMSO)干预组分别标记为SB组、LY组、U0126组和DMSO组.RT-PCR和流式细胞术检测Ad-HBx转染对CD59和Crry基因和蛋白的表达,MTT法检测其对补体激活的影响;观察P38、PI-3K、ERK1/2通路抑制剂及DMSO对足细胞CD59和Crry表达的影响.结果 B组、Ad组和Ad-X组CD59表达率分别为(17.71±3.81)%、(18.29±3.36)%和(45.7±9.01)%;B组、Ad组和Ad-X组Crry蛋白表达率分别为(18.00±2.31)%、(21.78±2.01)%和(47.45±9.95)%,Ad-X组CD59和Crry蛋白表达率显著高于B组和Ad组(P值均＜0.005);Ad-X组CD59和Crry mRNA光密度明显强于B组和Ad组;SB组、LY组、U0126组和DMSO组CD59表达率分别为(17.35±1.24)%,(46.19±9.77)%,(43.03±6.83)%和(40.04±6.39)%;Crry蛋白表达率分别为(18.14±3.56)%,(31.95±1.68)%,(31.95±1.69)%和(37.14±3.92)%,与Ad-X组比较,SB组CD59和Crry蛋白表达率明显降低(P值均＜0.05),MTT法提示在各个血清稀释点上,Ad-X组细胞裂解抑制率均明显高于B组和Ad组(P值均＜0.05).结论 HBx可能通过活化P38MAPK通路上调小鼠足细胞CD59和Crry蛋白和基因的表达,抑制补体介导的足细胞裂解,这可能导致HBV在足细胞潜伏感染,不易被清除,从而在HBV-GN发生中发挥作用.